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Un nouvel hémoplasma de mycoplasme hémotropique chez un patient atteint d’anémie hémolytique et de pyrexie

Un patient souffrant de neutropénie modérée chronique, d’hémolyse aiguë et de pyrexie s’est avéré être infecté par une nouvelle espèce d’hémoplasme. Une réponse clinique à la doxycyline a été notée et la moxifloxacine a été ajoutée ultérieurement pour faciliter l’élimination des infections. infection hémoplasma chez un humain

La pyrexie persistante et l’hépatosplénomégalie ont entraîné une hémorragie artérielle hépatique, réfractaire à l’embolisation radiologique et une laparotomie requise pour obtenir l’hémostase. L’histologie hépatique n’a révélé aucun caractère étiologique spécifique. La pyrexie postopératoire persistante a été attribuée à l’infection d’un hématome sous-capsulaire hépatique. L’amoxiclav et le métronidazole, puis la vancomycine et la pipéracilline-tazobactam, ont été utilisés pour élargir la couverture d’une infection possible par des agents pathogènes hospitaliers. Pendant la période postopératoire, le patient a développé une insuffisance rénale. La biopsie rénale a révélé une néphrite tubulaire interstitielle aiguë avec formation de granulomes focaux et était négative pour l’acide. bacilles et champignons rapides Les tests de concentration des anticorps anti-neutrophiles cytoplasmiques, et: les anticorps protéiniques faibles étaient positifs. Le lupus érythémateux disséminé a été envisagé, mais des caractéristiques insuffisantes étaient présentes pour établir un diagnostic; bien que le patient soit positif pour l’anticorps antinucléaire ANA, cytopénies et arthralgie, l’ADN double brin et les tests anticoagulants lupiques étaient négatifs et il n’y avait pas de sérosite, d’ulcère buccal, de photosensibilité, de trouble rénal préexistant, de trouble neurologique, de malaire ou rash discoïde Néanmoins, prednisolone mg une fois par jour a été commencé en vue d’une sarcoïdose possible ou d’autres troubles immunitaires Piperacillin-tazobactam et doxycycline mg une fois par jour par voie orale pendant plusieurs jours ont également commencé comme traitement empirique de pneumonie nosocomiale, diagnostiquée par fièvre, Crépitations inspiratoires, et ombrage dans la base droite sur la radiographie thoracique Les cultures de sang et d’expectoration étaient négatives La pyrexie s’est résorbée en quelques heures et après résolution de la pneumonie, récupération du nombre de plaquettes et aucun besoin immédiat de transfusion pendant plusieurs jours. et a continué de prendre de la prednisolone vingt-et-un jours après l’arrêt de la pipéracilline-tazobactam et doxy cycline, le patient représenté avec étourdissements, nausées, pétéchies sur les jambes, et pyrexie Anémie taux d’hémoglobine, g / L et thrombocytopénie numération plaquettaire, × cellules / L étaient présents mais le nombre de leucocytes était dans l’intervalle de référence. cellules / L; nombre de neutrophiles, × cellules / L La dose de prednisolone a été augmentée mg une fois par jour et l’azathioprine mg une fois par jour a été initiée, mais l’hémolyse continue positive test et le bas niveau d’haptoglobine nécessitait plusieurs unités de transfusions pendant plusieurs jours Traitement avec IgG g / kg était inefficace. La cellularité de la moelle osseuse était normale avec un pigment brun probable hémosidérine et une absence d’hémophagocytose Une scintigraphie au gallium montrait une fixation tractionnelle importante dans tout le squelette axial mais aucune prise hépatosplénique L’imagerie par résonance magnétique montrait une faible intensité de signal de la moelle osseuse sur les images pondérées en T Une autre analyse de la moelle osseuse a révélé une hémophagocytose seulement. Les tests de bacilles acido-alcoolo-résistants, de virus Epstein Barr, de cytomégalovirus et de Leishmania species spp par PCR et sérologie étaient tous négatifs. Une hémolyse et une pyrexie de température allant jusqu’à dans l’initiation du traitement à la doxycycline m Après administration de ce traitement, la pyrexie s’est résorbée en quelques heures, la thrombocytopénie a disparu en quelques jours et la concentration en hémoglobine g / L était dans l’intervalle de référence de la semaine. la rechute clinique, a été soumis à l’ARN ribosomique ARN ribosomique eubactérien S gène PCR pour identifier toute infection bactérienne encore non identifiée Les données de séquence d’un produit PCR amplifié ont montré la plus grande identité% et%, respectivement à l’espèce hémoplasma hémotropique vétérinaire nom hémoplasma Mycoplasma haemomuris GenBank no U et “Candidatus Mycoplasma turicensis” GenBank pas DQOn sur la base des recommandations de traitement pour l’hémoplasmose vétérinaire, la doxycycline a été maintenue pendant des semaines et l’azathioprine a été arrêtée et la prednisolone progressivement retirée. Cependant, quelques jours après l’arrêt de la doxycycline L’hémolyse a été confirmée comme auparavant avec une splénomégalie douloureuse. Des échantillons de moelle osseuse ont été prélevés, qui ont montré des inclusions de macrophages compatibles avec l’hémolyse. La doxycycline mg deux fois par jour a été redémarrée et le patient a été amélioré immédiatement; La moelle osseuse était négative pour Mycoplasma et Ureaplasma spp par culture, mais était à nouveau positive pour l’ADN hémoplasma, cette fois démontré par PCR quantitative de la panhemoplasma qPCR PCR, séquençage, et phylogénie de la Les gènes GU et GU de l’ARN ribosomique quasi-complet de l’ARNr et de l’ARN de la RNase P ont confirmé respectivement que les espèces d’hémoplasmes sont des

Figure Vue largeDownload slideAnalyse phonologique de séquences d’ARN ribosomiques presque complètes de l’ARN ribosomique S pour les espèces d’hémoplasmes nouvellement décrites représentées en gras et autres espèces d’hémoplasmes disponibles L’arbre a été construit par la méthode de jointure voisine Les distances évolutives sont aux échelles montrées L’ensemble de données a été rééchantillonné temps pour générer des valeurs de pourcentage bootstrap, et les valeurs de & gt;% sont données aux nœuds de l’arbre L’arbre phylogénétique était basé sur Clostridium innocuum GenBank non M Les numéros d’accession de GenBank sont indiqués pour toutes les séquences aL’ARNR de Candidatus Mycoplasma haemobovis séquence génétique GenBank no EF partage% identité avec les paires de bases de la séquence du gène S rRNA de l’hémoplasma de buffle “Candidatus Mycoplasma haemobos” GenBank no EUFigure View largeTélécharger la lameL’analyse phonologique de séquences d’ARN ribosomiques presque terminées de l’ARN ribosomal pour les espèces d’hémoplasmes nouvellement décrites en gras et autres disponibles Espèces asma L’arbre a été construit par la méthode voisine Les distances évolutives sont aux échelles montrées L’ensemble de données a été rééchantillonné fois pour générer des valeurs bootstrap en pourcentage, et les valeurs de & gt;% sont données aux nœuds de l’arbre L’arbre phylogénétique était enraciné à Clostridium innocuum GenBank non M Numéros d’accession GenBank sont indiqués pour toutes les séquences aL’Hémoplasme bovin “Candidatus Mycoplasma haemobovis” S séquence du gène ARNr GenBank no EF partage% identité avec les paires de bases de la séquence du gène S rRNA de l’hémoplasma de buffle “Candidatus Mycoplasma haemobos “GenBank non UE

Figure Vue largeDownload slideAnalyse chronologique des séquences géniques partielles de l’ARN ribonucléique RNase P ARN pour les espèces d’hémoplasmes nouvellement décrites représentées en caractères gras et autres espèces d’hémoplasmes disponibles L’arbre phylogénétique était basé sur Clostridium innocuum GenBank no U L’arbre a été construit par la méthode voisine Les nombres d’accès GenBank sont indiqués pour toutes les séquences L’ensemble de données a été rééchantillonné fois pour générer des valeurs de pourcentage bootstrap, et les valeurs de & gt;% sont données aux nœuds de la treeFigure View largeDownload analysePhylogénétique du gène RNase P ARN partiel Séquences géniques de rnp pour les espèces d’hémoplasmes nouvellement décrites représentées en caractères gras et autres espèces d’hémoplasmes disponibles L’arbre phylogénétique était basé sur Clostridium innocuum GenBank non U L’arbre a été construit par la méthode de jointure voisine Les distances évolutives sont aux échelles indiquées Les numéros d’accession GenBank sont affichés pour toutes les séquences L’ensemble de données était temps de rééchantillonnage pour générer des valeurs de pourcentage bootstrap, et les valeurs de & gt;% sont données aux nœuds de l’arbre. Le traitement par doxycycline est poursuivi et qPCR est régulièrement utilisé pour surveiller la quantité d’ADN hémoplasmique dans le sang Tableau sanguin qPCR positif après des semaines de doxycycline La moxifloxacine mg une fois par jour a été ajoutée sous forme de quinolone avec une excellente activité contre les mycoplasmes. La patiente a continué à prendre deux mois de traitement à la doxycycline et à la moxifloxacine pendant lesquelles elle a eu un nombre de cellules neutropéniques. nombre de réticulocytes; Le traitement a été stoppé et le patient a été contrôlé par un test qPCR de panhemoplasma sanguin, qui a été négatif tout au long du suivi. La concentration de l’ANA après le traitement était:, le test de l’ADN ds était négatif, et le niveau de CRP était normal Un an après l’arrêt du traitement, le patient se porte bien, autre que la polyarthralgie en cours et une faible numération leucocytaire Le sang du mari et du chien du patient était négatif pour l’ADN hémoplasmique par qPCR

Tableau échantillons analysés, les résultats de réaction quantitative Polymerase Chain, Détails cliniques et traitement Détails temps monthsrelative à initialpresentation Type d’échantillon Résultats Panhemoplasma qPCR: pas absolu de copies hémoplasma par PCR [GAPDH valeur Ct] CV clinique et / ou le traitement du sérum x pyrexie, pancytopénie, hépatosplénomégalie moelle osseuse x pyrexie, hémolyse Sérum x Sérum Non détecté DoxycyclineWithdrawal de prednisolone os marrowa x x pyrexie, splénomégalie, hémolyse Blood & lt; Doxycycline BloodBone moelle & lt; & lt; Doxycycline & amp; moxifloxacine Sang & lt; Sang Non détecté Sang Moelle osseuse & lt; Non détecté Sang & lt; Sang Non détecté Sang Non détecté Sang asymptomatique Non détecté Sang Non détecté Sang Non détecté Sang Non détecté Sang Non détecté Temps mois par rapport à la présentation initiale Type d’échantillon Panhemoplasma Résultats qPCR: absolu non des copies de hémoplasma par PCR [GAPDH Ct value] CV clinique et / ou le traitement du sérum x pyrexie, pancytopénie, hépatosplénomégalie moelle osseuse x pyrexie, hémolyse Sérum x Sérum Non détecté DoxycyclineWithdrawal de prednisolone os marrowa x x Pyrexie, splénomégalie, hémolyse Sang & lt; Doxycycline BloodBone moelle & lt; & lt; Doxycycline & amp; moxifloxacine Sang & lt; Sang Non détecté Sang Moelle osseuse & lt; Non détecté Sang & lt; Sang Non détecté Sang Non détecté Sang asymptomatique Non détecté Sang Non détecté Sang Non détecté Sang Non détecté Sang non détecté Abréviations: Glycéraldéhyde – phosphate déshydrogénase La GAPDH a été amplifiée en tant que contrôle interne Le nombre seuil de Ct a été obtenu par réaction quantitative en chaîne par polymérase qPCR pour le contrôle interne GAPDH Les résultats qPCR pour des échantillons d’origine différente ne peuvent être comparés directement en raison des différences de dilution, de milieu de collecte et de volume utilisés pour Extraction de l’ADN Cependant, les nombres de copies d’hémoplasma représentés représentent ceux présents par PCR, ce qui équivaut au nombre de copies par μL de sang, de moelle osseuse ou de sérum, en supposant une purification complète de l’ADN et une amplification PCR. érythrotrope, l’analyse par PCR d’échantillons contenant des érythrocytes de sang et de moelle osseuse est généralement Dans certains cas, certains échantillons de sérum ont généré des résultats positifs pour l’hémoplasme. Nous pensons que cela reflète probablement le très grand nombre d’organismes présents dans le sang au moment de la préparation du sérum, ce qui signifie que même un petit nombre de nombre d’organismes de globules rouges a permis leur détection dans le sérum par PCRaTwo différents agents de conservation tryptique Soya Broth et transport viral médias ont été utilisés pour la collecte de la moelle osseuse, et qPCR a été réalisée à la fois, ce qui donne des résultats shownView LargeDuring l’hospitalisation prolongée, le sang série et les cultures d’urine ont été négatifs Tests sérologiques pour le virus de l’immunodéficience humaine VIH, Toxoplasma gondii IgM, Coxiella burnetii, Brucella abortus, Burkholderia pseudomallei, Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia chaffeensis, Borrelia burgdorferi, Tropheryma whipplei, Histoplasma capsulatum, Rickettsia conorii, Rickettsia typhi, Rickettsia felis et Francisella tularensis étaient tous négatifs Sero tests logiques pour Chlamydophila concentration psittaci,: et Chlamydophila concentration pneumoniae,: ont été positifs, mais sont restés inchangés sur l’échantillonnage de répétition et ont été supposées représenter une infection antérieure Chlamydophila En particulier, Bartonella henselae, Bartonella quintana, Bartonella genre spécifique PCR, sérologie Mycoplasma pneumoniae, et Les tests d’agglutination des mycoplasmes étaient tous négatifs. Les causes immunitaires de la neutropénie dans les années précédant la présentation ont été considérées. Les titres d’ANA étaient fluctuants, mais les tests ADN anti-ds étaient systématiquement négatifs depuis les années précédant la présentation et tout au long de la maladie fébrile. la patiente était neutropénique lors de sa présentation initiale, pendant son séjour à l’hôpital, sa numération leucocytaire est passée à l’intérieur de la plage de référence et, parfois, au-dessus de la plage de référence comme le nombre de polynucléaires neutrophiles. les comptes ont diminué aux niveaux vus avant l’infection

Discussion

Ce cas représente le premier signalement d’une nouvelle espèce hémoplasmique chez un humain en association avec une pyrexie réactive à la doxycycline, une anémie hémolytique et des antécédents de neutropénie modérée chronique. Le nom «Candidatus Mycoplasma haemohominis» est proposé pour ce nouvel organisme. Ce cas est unique de plusieurs manières: d’abord en décrivant l’infection humaine avec une nouvelle espèce d’hémoplasme distincte des hémoplasmes vétérinaires décrits, puis en associant l’hémoplasme humain à une hémolyse cliniquement significative, et en troisième lieu à l’utilisation de la qPCR pour quantifier l’hémoplasme chez l’humain. échantillons humains de diagnostic et donc surveiller la réponse au traitement Le diagnostic de l’infection hémoplasma chez ce patient était basé sur l’analyse PCR de l’ADN dérivé de la moelle osseuse, mais les échantillons de sang périphérique pourraient être une source alternative d’ADN pour le diagnostic. Les hémoplasmes infectent de nombreuses espèces de mammifères et peuvent induire anémie hémolytique Des infections de type hémoplasma humain ont été rapportées occasionnellement chez des patients immunodéprimés au moyen d’un diagnostic cytologique connu pour être très peu fiable Des méthodes de PCR sont maintenant utilisées pour étudier les infections hémoplasma humaines. Les infections hémoplasmiques humaines ont été rapportées en Chine , ces descriptions n’ont pas décrit la maladie clinique, la méthodologie PCR ou les espèces infectantes, rendant l’interprétation difficile. D’autres études ont décrit la présence d’ADN d’espèces hémoplasmiques vétérinaires chez l’homme. : Mycoplasma suis , Mycoplasma haemofelis et / ou Mycoplasma haemocanis et Mycoplasma ovis Cependant, toute association entre l’infection hémoplasmique et les signes cliniques dans ces rapports est difficile à établir en raison du manque d’informations cliniques fournies [, ,] ou une infection concomitante à B henselae Il est peu probable que la co-infection avec B artonella spp était présent dans ce cas en raison des résultats sérologiques et PCR négatifs pour Bartonella spp obtenus et du fait que seul l’ADN hémoplasma a été détecté par PCR S-ADN. Il est possible que la neutropénie du patient joue un rôle dans le développement initial de l’hémoplasmose clinique. immunocompromise Il est moins probable qu’une infection hémoplasma chronique ait joué un rôle dans la neutropénie, comme en témoignent les antécédents de neutropénie antérieure à toute maladie et le retour à un faible nombre de leucocytes avec traitement efficace et clairance de l’infection sur qPCR spécifique, mais cela reste un L’origine de l’infection hémoplasmique chez ce patient est inconnue Il est possible qu’elle représente une infection zoonotique acquise, par exemple, chez des arthropodes hématophages comme les tiques, les puces et les poux ou par transmission directe d’un autre hôte mammifère à travers inoculation parentérale ou orale du sang , mais aucun événement de transmission de ce type n’a été rappelé par le patient avant l’apparition Il est possible que ce nouvel hémoplasma représente une espèce dont l’hôte principal est l’homme. Des infections hémoplasmiques existent chez des espèces vétérinaires tant au Royaume-Uni qu’en Australie, donc la transmission aurait pu se produire avant, pendant ou après les vacances du patient. Comme décrit ailleurs pour les infections hémoplasmes vétérinaires , le patient décrit ici a montré une réponse clinique remarquable à la doxycycline. Par la suite, un cours de doxycycline et de Les faibles taux d’ADN de l’hémoplasme détectés par qPCR à certains moments au cours du traitement par la doxycycline et la moxifloxacine pourraient refléter l’amplification de l’ADN hémoplasma non viable qui n’a pas eu d’effet sur l’ADN de l’hémoplasma. été effacé de la circulat En conclusion, l’hémoplasmose doit être considérée comme un diagnostic différentiel chez les patients atteints d’anémie hémolytique et de pyrexie. Le test de PCR pour l’hémoplasme doit être inclus dans l’étude de l’ADN hémoplasmique. ces patients pour permettre la détection rapide de cette infection, qui peut être plus fréquente que précédemment réalisé

Remarques

Remerciements

Le patient a donné son consentement à tous les tests et procédures L’approbation éthique de l’Université de Bristol a été obtenue pour l’analyse des échantillons humains Nous remercions Hal Neimark et Chris Helps pour les discussions utiles pendant la préparation de ce manuscrit, et Sarinder Day, Daniel Thomas et Andre Buckeridge pour le support technique

Aide financière

Ce travail a été soutenu par la subvention du Wellcome Trust; la Bourse de recherche postdoctorale de l’Université de Bristol à E N B; et Pfizer Santé animale pour E N B

Conflits d’intérêts potentiels

Tous les auteurs: Aucun conflit rapporté Tous les auteurs ont soumis le formulaire ICMJE pour la divulgation des conflits d’intérêts potentiels Conflits que les éditeurs considèrent pertinents pour le contenu du manuscrit ont été divulgués